难转染细胞实验中，我们为什么逐渐从化学转染转向电转染？

做过原代细胞、干细胞或者其它难转染细胞实验的人，一般都会遇到这样一个很实际的问题：

理论上有很多转染的方法，但是能够同时保证转染效率和细胞状态的方案并不是很容易找到。

特别是当研究进入到基因编辑、RNA的功能研究、细胞的功能验证等等阶段的时候，我们所关心的已经不是“外源分子是否进入了细胞"了，而是在于进入之后，这批细胞是否还处于良好的状态来完成后面的实验。

转染效率很高，并不代表该实验一定会成功

对一个细胞转染的过程进行评价的时候，至少要同时考虑两个方面的内容：

第一是外源分子导入效率的问题；

二是转染后细胞的活性和生物学功能。

仅仅提高转染效率，而使大量的细胞死亡，或者明显地改变了细胞的生理状态，那么对于以后的实验来说意义不大。

特别是对于原代细胞、干细胞以及一些敏感细胞的实验而言，该问题更为严重。

因此，在选择转染方案的时候，我们越来越倾向于从整个实验链的角度来考虑问题，而不再只是单纯地去比较某个特定的时间点上阳性率的情况。

电转染是一种可以用来处理部分难转染细胞的方法。

不同于依靠化学载体介导进入细胞的方式，电转染则是利用短时间的电脉冲来改变细胞膜的通透性，从而使得DNA、RNA、核苷酸、蛋白质等外源物质可以进入到细胞中去。

该种方式的一个明显的优点就是不需要用到其他的化学转染试剂。

对于一些对化学试剂比较敏感或者传统的脂质体转染效率较低的细胞系来说，电穿孔就成为了常用的替代方法之一。

但是电转染本身并不是简单的“提高电压"。

电压、电容、电阻、脉冲时间、细胞密度、缓冲液体系和样本电阻等都会对最后的结果产生影响。

影响实验质量的是是否能找到合适的电场参数窗口。

## 优化参数的能力比一味地追求高压更加重要

在实际的实验当中，并不是一开始就用最高的电压去试，而是根据细胞种类、细胞大小、细胞膜性质以及实验的目的来逐步调整电压。

V-leader 开云网页版登录入口 Gene Pulser 630 采用指数衰减波脉冲模式，可以对相关的电转参数进行调节，并支持脉冲过程检测和记录。

设备可以同时提供预脉冲样品电阻测量的功能。

对于实验条件的优化来说是非常有用的。

由于样品体系的电阻状态会干扰到实际的脉冲过程。在正式脉冲之前就掌握好样品体系的状态，可以提前发现一些异常情况，避免不必要的无效实验。

对于要建立新的细胞电转系统的研究团队来说，“先检测、再执行、后记录"这样的流程要比单纯的依靠经验去试错要容易得多来建立起标准的方法。

实时波形可以使得实验失败不再依靠猜测

在做电转实验的时候，最容易出现的情况就是：

实验没有成功，但是不知道为什么会失败。

如果没有实际脉冲过程的数据记录，我们通常只能重新检查细胞的状态、缓冲体系、质粒浓度以及操作步骤，然后再重新做一遍。

Gene Pulser 630可以显示出电穿孔过程中所出现的脉冲波形，并且能够把实际电压、脉冲时间、脉冲间隔以及脉冲次数都记录下来。

对实验人员而言，这就多出一个判断实验过程是否正常的依据。

在进行参数筛选的时候，可以把不同电转条件下的脉冲数据和转染效率、细胞存活率进行对应，从而逐步建立起适合自己的实验体系的参数数据库。

对于要经常重复做同一种实验的团队来说，这非常重要。

对于难于转化染样本的情况来说，减少失败次数本身也是提高效率的一种方式

如果是处理普通的细胞的话，一次实验失败还可以接受。

但是原代细胞、干细胞以及一些特殊的来源样本的制备成本和时间成本通常都会比较高。

因此，在对一台电转染仪进行评价的时候，并不仅仅只看它能达到多高的转染效率，还会考虑：

设备是否稳定；

是否有异常防护功能；

新的操作人员是否可以重复实验；

参数能否记录；

在出现问题的时候有没有技术支援团队来帮助优化。

从这个角度来考虑的话，V-leader 开云网页版登录入口 Gene Pulser 630的价值并不仅仅在于完成了第一次电脉冲，更在于它能够帮助科研人员把电转染的过程变成可以重复、可以分析的一种技术手段。可以改进的实验方法。

对于正在由常规细胞系向原代细胞、干细胞以及更为复杂的实验模型发展中的实验室来说，这要比简单的换用一种转染试剂更有长远的意义。